Pemeriksaan Hepatitis A

      IgM anti HAV

Metoda      : ELISA

Prinsip       : Hepalisa IgM anti HAV tes berdasarkan pada metoda sandwich immunoassay. Ketika anti human IgM yang direkatkan pada well sample diinkubasi dengan spesimen yang diencerkan, pada fase padat akan mengendap sejumlah IgM yang selanjutnya diinkubasi dengan hepatitis A Viral solution dan anti HAV peroksidase solution, membentuk ikatan komplek dan melepaskan peroksida yang bereaksi dengan chromogen membentuk senyawa berwarna biru yang intensitasnya sebanding dengan konsentrasi IgM anti HAV dalam sampel. Reaksi dihentikan dengan penambahan asam sulfat sebagai stop solution sehingga warna berubah menjadi kuning yang dibaca absorbannya dengan alat ELISA Plate Reader pada λ 450 nm dan 620 nm.

Alat dan bahan   :

-          Inkubator

-          ELISA Plate reader

-          Mikropipet 1000 µl, 500 µl, 100 µl, 50 µl dan 5µl

-          Rak well  beserta penutupnya

-          Reagen kit IgM anti HAV

-          Tip kuning

-          Washing solution

-          Sampel (serum)

Cara Kerja :

a)  Dilakukan pengenceran : 10 µl  serum + 1000 µl NaCl 0,85 %.

b)  Dimasukkan kedalam well :

o   100 µl kontrol positif

o    100 µl kontrol negative

o    100 µl sampel yang sudah diencerkan

o    Ditutup, inkubasi selama 1 jam pada  suhu 37⁰C.

c)      Dicuci sebanyak 6 kali.

d)     Ditambahkan 50 µl HAV solution.

e)     Ditambahkan 50 µl HAV peroksidase.

f)       Ditutup, kemudian diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37⁰C.

g)     Ditambahkan 50 µl anti TMB A dan 50 µl TMB B.

h)     Ditutup dan disimpan selama 30 menit pada suhu kamar.

i)       Ditambahkan 100 µl H₂SO₄ 2N.

j)       Dibaca dengan Plate Reader pada λ 450 nm dan 620 nm

Cut Off  : Absorban negatif + 0,250

Interpretasi Hasil :

Ø  Negatif   : absorban < Cut Off

             Ø  Positif     : absorban > Cut Off