Bakteriologi

Menghitung jumlah kuman secara tidak langsung

Tujuan : untuk mengetahui jumlah kuman pada bahan makanan atau minuman

Teori :

Untuk mengetahui layak tidaknya suatu makanan atau minuman ada beberapa faktor salah satunya adalah dengan mengetahui banyaknya atau jumlah kuman yang ada pada bahan tersebut dengan suatu standar

Perhitungan jumlah kuman dapat dlakukan dengan cara menghitung :

1. Total count menghitung seluruh kuman dalam sampel baik yang hidup maupun yang mati

2. Viable count menghitung seluruh kuman dalam sampel yang masih hidup

Alat : Erlenlmeyer, cawan petri, tabung reaksi, pipet ukur, inkubator, oven, autoclave

Bahan : Agar Nutrien, Nacl 0,9 %

Sampel : teh gelas dalam plastik

A. Sterilisasi alat

     Erlemeyer ditutup dengan kapas dan kasa dibungkus dengan kertas, tabung rekasi juga sama

     Pipet ukur dan cawan petri dibungkus satu persatu

     Masukan ke dalam oven sterilkan pada suhu 1500 c selama 1 jam

B. Pembuatan media dan sterilisasi media

Agar Nutrien

- Timbang 14 gr masukan dalam 500 ml aquades

- Panaskan diatas penangas air supaya larutan homogen

- Sterilkan pada autoclove pada suhu 1210 c selama 15 menit

Nacl 0,9 %

- Timbang 4,5 gr Nacl larutkan dalam 500 ml aquades

- Masukan ke dalam masing masing tabung 9 ml tutup dengan kapas

- Sterilkan pada autoclove pada suhu 1210 c selama 15 menit

-

Pemeriksaan Jumlah kuman

- Siapkan 5 tabung reaksi yang telah diisi 9 ml NaCl 0,9 % steril beri tanda 10-1 , 10-2 , 10-3 , 10-4 dan kontrol

- Siapakan 5 cawan petri beri tanda 10-1 , 10-2 , 10-3 , 10-4 dan kontrol

- Siapakan 100 ml sampel

- Ambil 1 ml sampel masukan pada tabung reaksi 10-1 kocok sampai homogen

- Ambil 1 ml dari tabung 10-1 pindahkan pada tabung 10-2 kocok sampai homogen

- Ambil 1 ml dari tabung 10-1 masukan pada cawan petri tanda 10-1

- Tambahkan agar nutrien suhu 450  C sebanyak 15 – 20 ml digoyang perlahan-perlahan biarkan dingin

   dan beku,lakukan dengan cara yang sama pada semua pengenceran

- Masukan pada inkubator 370  C selama 2 x 24 jam

D. Pembacaan hasil jumlah kuman

- Hitung koloni yang tumbuh pada tiap tiap cawan petri

- Hitung jumlah koloni pada cawan petri kontrol

E. Perhitungan

Perhitungan hanya pada cawan petri yang menghasilkan koloni 30 – 300

C. Contoh Perhitungan :

       kontrol  :   : 1     koloni

  Pengenceran 10-1   : 370 koloni

  Pengenceran 10-1    : 200 koloni 

  Pengenceran 10-1    : 151 koloni

  Pengenceran 10-1     : 15   koloni

  Jumlah kuman : ( 200-1) x 100 + ( 151-1) x 1000

  2

 

  19.900 + 150.000

                 2

  84.950 kuman/ ml sampel